在上期，我们介绍了细胞转染的应用及分类的基础知识，本期将继续深入探讨细胞转染中常用的病毒转染技术。病毒转染是一种高效的细胞转染方法，通过病毒载体将外源基因包裹在病毒外壳中，利用病毒的天然感染性，将外源基因导入宿主细胞，从而实现基因的稳定表达。根据不同的病毒载体，病毒转染主要分为腺病毒（Adenovirus，ADV）、慢病毒（Lentivirus，LV）、逆转录病毒（Retrovirus，RV）和腺相关病毒（AAV）。在实验室中，慢病毒因其良好的使用范围与效率而广受欢迎。接下来，我们将重点介绍慢病毒的相关内容。

一、慢病毒的结构

慢病毒基于HIV-1（人类免疫缺陷病毒1型）发展而来，是一种具有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈现二十面体对称的球形结构。其外层为包膜，包膜蛋白决定了感染细胞的类型；内层依次为基质蛋白和衣壳，最内层包含两条相同的正股RNA链和多种酶，包括逆转录酶、整合酶和蛋白酶。

慢病毒的基因组较为复杂，以HIV-1为例，基因组包含9个基因，包括编码结构基因的gag、pol、env和调节基因tat、rev，以及辅助基因vif、vpr、vpu和nef。随着对慢病毒基因组的深入研究，逐步发展出第一代、第二代和第三代慢病毒系统，特别是第二代的三质粒系统和第三代的四质粒系统，成为目前的主流应用。

二、慢病毒的复制包装

为了提高靶细胞的转染效率，需要前期获得高滴度的慢病毒，这就需要进行慢病毒的复制包装。通常，按照一定比例将三种质粒共同转染到293T细胞中培养，48-72小时后，收集并离心含病毒的上清液，或进一步浓缩病毒。

三、慢病毒感染细胞的过程

慢病毒感染宿主细胞的第一步是通过表面的包膜蛋白与宿主细胞的受体结合，随后与细胞膜融合，释放出病毒内部的结构蛋白和酶。在逆转录酶的作用下，病毒的RNA被逆转录为DNA，并与整合酶形成整合前复合物。整合前复合物进入细胞核后，整合酶催化其整合至宿主基因组中，最终外源基因在宿主细胞质中被表达。

四、常见的慢病毒转染类型

1. **慢病毒荧光转染**：通过转染带有荧光标记（如GFP、mCherry、RFP等）的基因，使转染后的细胞能够发出特定波长的荧光，可通过荧光显微镜或流式细胞仪检测转染效率。

2. **慢病毒Luciferase化学发光转染**：此方法将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞或动物体内，随后加入底物荧光素，以测量光强度变化，尤其适用于活体动物的肿瘤生长检测。

3. **慢病毒细胞永生化转染**：通过慢病毒转染外源性永生化基因，将体外培养的原代细胞转变为具有无限增殖能力的细胞系。

【尊龙凯时】生物公司专注于为常用细胞系和原代细胞提供慢病毒转染服务，包括慢病毒转染绿色荧光蛋白（ZsGreen）、红色荧光蛋白（mCherry、RFP）、化学发光Luciferase（LUC）和SV40永生化转染等，现已建立近40种稳转细胞系。同时，我们还提供定制的慢病毒转染服务，确保满足不同研究需求。

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服务编号 | 转染类别 | 实验目标 | 实验周期
SNTS-L001 | GFP稳转 | 获得GFP稳定表达的细胞 | 3-4周
SNTS-L002 | RFP稳转 | 获得RFP稳定表达的细胞 | 3-4周
SNTS-L003 | mCherry稳转 | 获得mCherry稳定表达的细胞 | 3-4周
SNTS-L004 | LUC稳转 | 获得LUC稳定表达的细胞 | 3-4周
SNTS-L005 | SV40永生 | 获得SV40永生化的细胞（以原代细胞为主） | 6-8周

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